Som nämnts tidigare är en autoklav lika med en tryckkokare. Skillnaden är att handlingen av
autoklav är allvarligare.
Instrument som ska steriliseras förvaras i kammaren i autoklavens buk. Så snart autoklaven slås på skickas ett tätt moln av ånga in i kammaren. Vid denna tidpunkt börjar trycket och temperaturen att öka. Typiskt kommer de flesta autoklaver att vilja bibehålla en temperatur på cirka 120°C (cirka 250°F).
Enheten inkluderar också ett antal ventiler och rör för att tillåta ånga att komma in i kammaren och rikta förorenad luft till utloppet. Det är inte heller nödvändigt att applicera en specifik kombination av 120°C och 15 minuter. Olika kombinationer används beroende på inredningsmaterial.
Till exempel är autoklaver kända för att applicera en temperatur på 134-138°C under 3 minuter. På liknande sätt kan andra lämpliga kombinationer också användas.
Dessa förhållanden upprätthålls i cirka 15 minuter, vilket är tillräckligt för att döda varje mikroorganism och alla sporer. Processen förstör mikrobens inre och avslutar effektivt dess existens. Efter den nödvändiga tiden avlägsnas ångan och trycket minskas gradvis.
Processen bygger på att den förorenade luften i kammaren förskjuts med mättad ånga och att ångan tvingas att bestå, så att förlängd exponeringstid säkerställer effektiv sterilitet. Det är viktigt att notera att ångan varken är för varm eller innehåller mer än 5 % fukt.